В миру Иоанн Васильевич.
Родился около 1495 г. в городе Серпухове в семье священника. Овладел грамотой, освоил чтение Псалтири и церковное пение.
В 1512 г. уведен в плен крымскими татарами. В плену овладел разговорным татарским языком: мог не только хорошо говорить, но и писать по-татарски.
Через три года был выкуплен отцом.
Принял монашеский постриг с именем Варсонофий в Спасском Андрониковом монастыре, где бывал наездами святитель Акакий, епископ Тверской, неоднократно предсказывавший иеродиакону Варсонофию, что он станет преемником Акакия на Тверской кафедре.
В 1544 г. возведен митрополитом Московским Макарием в сан игумена Николо-Пешношской Мефодиевой пустыни близ Дмитрова.
В 1553 г. Пешношскую обитель посетил царь Иоанн Грозный, который обратил внимание на опытного наставника иноческой жизни, сведущего в татарском языке и нравах.
В 1555 г. в сане архимандрита был отправлен со святителем Гурием в Казань для основания там монастыря.
В 1556 г. устроил Преображенский монастырь в Казанском кремле и освятил в нем первый храм в честь святителя Николая Чудотворца, а позднее и Преображенский собор.
В 1567 г., по смерти епископа Тверского Акакия, возведен митрополитом Московским Филиппом в сан епископа Тверского.
В 1571 г. удалился на покой в основанную им в Казани обитель и пять лет провел в Преображенском монастыре, где принял великую схиму.
11 апреля 1576 г. скончался. Был погребен в Преображенском монастыре архиепископом Казанским Тихоном.
В 1595 г. были обретены мощи святителей Казанских Гурия и Варсонофия при строительстве по благословению патриарха Иова нового храма в честь Преображения Господня.
Жизнеописание святителей Гурия и Варсонофия составлено священномучеником патриархом Гермогеном.
Память празднуется 11/24 апреля, 4/17 октября и в Соборах Тверских святых и Казанских святых.